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?干擾素β-1A標(biāo)準(zhǔn)品usp-1342412 測(cè)定方法說(shuō)明

發(fā)布時(shí)間: 2023-03-27  點(diǎn)擊次數(shù): 689次

1342412 干擾素β-1A標(biāo)準(zhǔn)品 (200 ng)(需要國(guó)際冷鏈運(yùn)輸)

CAS:145258-61-3   分子式:C908H1406N246O252S7

中文同義詞:干擾素 BETA-1A; 干擾素Β-1A; 干擾素Β-1A 

英文名稱:Interferonbeta1a/Humaninterferonbeta1a


干擾素β-1A標(biāo)準(zhǔn)品1342412 檢測(cè)方法:在測(cè)定日,稀釋10,000或50,000 pg/mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液,用培養(yǎng)基B稀釋至8單位/mL或40 pg/mL濃度的試液,從該中間稀釋液中,連續(xù)稀釋6次,采用1.3倍稀釋步驟,得到濃縮系列。

從孵化器中取出含有細(xì)胞的培養(yǎng)板,并對(duì)其進(jìn)行目視檢查,以確定細(xì)胞是合流的,并且看起來(lái)健康且未受污染。把媒體從井里全部拋棄掉。接下來(lái),從G行中最不濃縮的溶液開(kāi)始,移動(dòng)到B行,每種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液加100 uL,然后用設(shè)計(jì)好的平板布置,將100 ul介質(zhì)B添加到A和H行,在37°C的孵化器中加入5%的二氧化碳(COZ),在37℃下孵育20~24小時(shí)。

第二天,用培養(yǎng)基B將病毒溶液稀釋至預(yù)定的合格稀釋度。

干擾素β-1A標(biāo)準(zhǔn)品1342412從培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)板,并全部取出每個(gè)孔中的溶液。將100µL培養(yǎng)基B添加到每個(gè)板中A行的所有孔中。向其余平板上的所有孔中加入100µL病毒溶液。在含有5%二氧化碳(CO2)的培養(yǎng)箱中,在37°C下再次培養(yǎng)板28–30小時(shí)。

第二天,從培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)板,并全部取出每個(gè)孔中的溶液。向板的所有孔中加入50µL NBB溶液。將培養(yǎng)板在37°C的培養(yǎng)箱中與5%二氧化碳(CO2)一起培養(yǎng)60±15分鐘。取出培養(yǎng)板,從所有孔中搖出NBB溶液,并用紙巾吸干。向每個(gè)孔中加入100µL磷酸鹽緩沖鹽水,然后搖勻該溶液,用紙巾將板吸干,再重復(fù)一次。

接下來(lái),向每個(gè)孔中加入100µL的50mM氫氧化鈉。將平板放在振蕩器上NLT 1分鐘,NMT 96小時(shí)。使用合適的平板讀數(shù)器讀取620 nm波長(zhǎng)下平板的吸光度。

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